پپتید کلاژن نوع II استخوان گاو: از آزمایشگاه تا زندگی ، ما مفاصل خود را با علم سالم نگه می داریم

اتصالات ، "یاتاقان های دقیق" که از حرکت انسانی پشتیبانی می کنند ، اغلب به دلیل پیری ، صدمات ورزشی یا حمله به بیماری ها به تدریج از بین می روند. داده ها نشان می دهد که بیش از 100 میلیون بیمار مبتلا به استئوآرتریت در چین وجود دارند و میزان بروز آرتریت روماتوئید 0.3 ٪ تا 0.4 ٪ است. افراد بی شماری به دلیل درد مفاصل و حرکت محدود در شرایط زندگی دشوار قرار گرفته اند.

در برابر این زمینه ، هونان جیائی ، با تکیه بر سیستم تحقیقات بین المللی برش نوع II نوع II ، همراه با فناوری ژنتیکی ، تشخیص نشانگر نشانگر و تأیید مدل حیوانی ، پپتیدهای کلاژن استخوان گاو جیایی را ایجاد کرده است. این محصول بخش های پپتید فعال با وزن بالا و کم مولکولی را از استخوان های گاو استخراج می کند ، که با اجزای غضروف انسانی بسیار همولوگ هستند. داده ها نشان می دهد که می تواند سطح CTX-II ، یک نشانگر تخریب غضروف را به میزان قابل توجهی کاهش دهد ، و بیان پپتید پپتید تازه. 86}}} ٪ از کاربران گزارش تسکین درد را افزایش دهد ، و دامنه حرکت مفاصل در افراد بالای 65 سال با 40 ٪ افزایش یافته است.

I. روش تحقیق: تأیید علمی درجه یک فعالیت پپتید کلاژن

مجله معتبر بین المللی "بیوشیمی از کلاژن" خاطرنشان می کند که کلاژن نوع II جزء اصلی غضروف مفصلی (حسابداری 95 ٪) است ، و ثبات ساختاری آن به طور مستقیم مقاومت فشاری مفصل را تعیین می کند. این تحقیق عمیقاً از طریق روشهای زیر مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرد:

تجزیه و تحلیل مکانیسم زیر مولکولی: از یک مدل موش تراریخته (حذفی ژن Col2A1) برای مشاهده تغییرات ساختاری سلولهای غضروفی و الیاف استفاده شد.

تشخیص نشانگرهای زیستی: چندین روش ایمونواسی (مانند C2C ، CTX-II ، CPII و غیره) را توسعه دهید تا دقیقاً سطح تخریب و سنتز کلاژن را تعیین کنید.

تأیید مسیر هیدرولیتیک: تأیید شد که متالوپروتئینازهای ماتریس (مانند MMP-13) آنزیم های کلیدی برای تخریب کلاژن هستند و قطعات پپتید کلاژن خاص می توانند فعالیت پوکی استخوان را مهار کنند.

اتصال فناوری Hunan Jiayi: این محصول فناوری هیدرولیز آنزیمی جهت را به طور دقیق برش کلاژن نوع II از استخوان گاو ، تولید پپتیدهای فعال مولکول کوچک (وزن مولکولی <1000DA) ، تضمین می کند تا حفظ کامل مناطق عملکردی هسته (مانند ساختار مارپیچ سه گلی Xy).

نمونه های تحقیق: شواهد تجربی دقیق از حیوانات به انسان

آزمایش های موش تراریخته نشان داد که کمبود کلاژن نوع II منجر به اختلال سلولهای غضروفی و رشد غیر طبیعی استخوان طولانی (مرجع [12]).

در عصاره غضروف بیماران مبتلا به آرتروز ، سطح نشانگرهای تخریب کلاژن (C1،2C و غیره) بیش از سه برابر افزایش یافته است (مرجع [24]).

آزمایش ادرار تأیید کرد که غلظت CTX-II در بیماران مبتلا به آرتریت به طور قابل توجهی بالاتر از افراد سالم بود (مرجع [31]).

 

قابلیت ردیابی مواد اولیه Hunan Jiayi: استخوان های گاو با کیفیت بالا با دقت انتخاب شده از چرا. آزمایش شخص ثالث تأیید کرده است که محتوای کلاژن نوع II بیش از 30 ٪ است ، بدون هورمون یا باقیمانده فلزات سنگین (گزارش های آزمایش قابل تأیید است).

داده های کلیدی تحقیق: شواهد جامد پپتیدهای کلاژن

شاخص تشخیص	جمعیت سالم	بیماران مبتلا به آرتروز	اثر مداخله پپتیدهای کلوژن
نشانگر CTX-ⅱ DEGRADATION CTX-II	سطح عادی	2.5 بار افزایش یافته است	به طور قابل توجهی کاهش یافته است (P<0.01)
نشانگر cpiisynthetic cpii	پایدار	بیماران مبتلا به آرتریت روماتوئید سطح بالایی دارند	ترویج تعمیر غضروف
فعالیت استئوکلاست	/	/	نرخ مهار به 70 ٪ می رسد

 

 

 

پپتید کلاژن استخوان گاوی Jiayi: کلاژن نوع II ، به عنوان "اسکلت" غضروف ، 95 ٪ از کل کلاژن موجود در غضروف و تقریباً 60 ٪ از وزن خشک را تشکیل می دهد. ثبات آن مستقیماً خاصیت ارتجاعی فشاری مفصل را تعیین می کند. هونان جیائی پپتید استخوانی گاو ، از طریق فن آوری هیدرولیز آنزیمی هدفمند ، بیش از 90 ٪ برای بخش های پپتید فعال در محصول به دست آورد و قطر مولکولی در محدوده طلایی حدود 1.5 نانومتر کنترل می شود ، که با آن بسیار ارزشمند است. به PIIBNP موجود در محصول مورد آزمایش قرار گرفته است تا به طور قابل توجهی فعالیت استئوکلاست ها را مهار کند - این با نتیجه تحقیق سازگار است که "PIIBNP می تواند باعث جذب استخوان شود" ، فراهم کردن محافظت دوگانه برای مفاصل: نه تنها ماتریس غضروف را ترمیم می کند بلکه باعث از بین رفتن استخوان می شود. ​

نتیجه گیری تحقیق: سه عملکرد اصلی پپتیدهای کلاژن

ترمیم ساختار غضروف: پپتیدهای کلاژن نوع II (مانند PIIBNP) تمایز استئوکلاست را مهار می کند و از بین رفتن استخوان از طریق مسیرهای سیگنالینگ اینتگرین کاهش می یابد. ترویج سنتز پروپتیدهای CPII توسط سلولهای غضروفی و تسریع در بازسازی الیاف کلاژن [5،46].

محافظت ضد التهابی و مفصل: مسدود کردن فعال سازی بیش از حد MMP-13 و کاهش تخریب کلاژن [19،32] ؛ برای کاهش التهاب مشترک ، مسیر هسته ای فاکتور-KB را تنظیم کنید.

پشتیبانی تغذیه ای طولانی مدت: چرخه تجدید کلاژن غضروف تا 100 سال به طول می انجامد [13] ، و مکمل مداوم پپتیدهای مولکول کوچک مهم است!

اثرات کاربردی عملی: شهادت کاربر محصولات Hunan Jiayi

مورد 1: خانم لی ، 55 ساله ، 8 سال سابقه آرتریت زانو دارد

پس از مصرف پپتید کلاژن استخوان گاو جیایی به مدت سه ماه ، درد هنگام بالا رفتن و پایین پله ها 70 ٪ کاهش یافت و MRI نشان داد که مساحت سایش غضروف بهبود یافته است.

مورد 2: آقای ژانگ ، علاقه مندان به ورزش

هر روز صبح و عصر 5 گرم به شیر آب اضافه کنید. ترک خوردگی مفصل از بین می رود و وزن چمباتمه تناسب اندام 20 کیلوگرم افزایش می یابد.

مورد 3: خانم هو به مدت 2 سال از درد مفاصل آسیب زا رنج می برد

پس از مکمل روزانه 15 گرم پپتید کلاژن استخوان گاو ، شاخص درد مفاصل افراد 40 ٪ کاهش یافته و انعطاف پذیری حرکت پس از 28 روز 35 ٪ افزایش یافته است

فناوری ثبت اختراع دوگانه: هیدرولیز آنزیمی با درجه حرارت پایین + جداسازی غشای نانوفیلتراسیون ، میزان احتباس پپتید فعال> 90 ٪

گواهینامه های معتبر: صدور گواهینامه ایمنی SGS ، شماره تشکیل پرونده FDA

0 هورمون ، 0 افزودنی: از استخوان های گوشت گاو طبیعی خالص ، ایمن و بدون گناه استخراج می شود.

صدور گواهینامه معتبر: ‌ پس از یک سری تحقیقات و آزمایش دقیق ، پپتید کلاژن استخوان گاو هونان جیائی تأیید شده است که یک مکمل سلامت کارآمد و ایمن است. این نه تنها به ترمیم غضروف مفصلی آسیب دیده کمک می کند ، بلکه باعث افزایش سلامت پوست و استخوان ها نیز می شود. علاوه بر این ، به دلیل ویژگی به راحتی جذب شده ، این محصول برای استفاده افراد در هر سنی بسیار مناسب است.

بررسی کاربر: ‌ از زمان راه اندازی آن ، پپتید کلاژن استخوان گاو هونان جیائی به نفع بسیاری از مصرف کنندگان به دست آورده است. بسیاری از کاربران گزارش داده اند که پس از استفاده طولانی مدت ، درد مفاصل آنها به میزان قابل توجهی بهبود یافته و پوست آنها نرم تر و ظریف تر شده است. حتی برخی از ورزشکاران و علاقه مندان به تناسب اندام اظهار داشته اند که این محصول به بهبود عملکرد ورزشی و سرعت بهبودی آنها کمک می کند.

【نکته علمی】 راهنمای گرفتن پپتیدهای کلاژن

50 ٪ دوز بهینه: روزانه 10 گرم تا 20 گرم بر روی معده خالی مصرف کنید ، با افزایش میزان جذب 50 ٪

جفت طلایی: ویتامین C+ گلوکوزامین ، ترویج اتصال متقابل کلاژن به الیاف

به عنوان یکی از معدود مارک های داخلی که تسلط بر فناوری هضم آنزیم پپتیدهای کلاژن نوع II را دارد ، هونان جیائی از پپتید فعال و با وزن کم مولکولی از استخوانهای گاوی عصاره می شود و اطمینان می دهد که اجزای آن بسیار همولوگ تا غضروف انسانی هستند. مراقبت های مشترک علمی را به یک بخش منظم از زندگی خود تبدیل کنید. هونان جیائی پپتید استخوانی گاو گاو از هر عمل شما محافظت می کند!

 

اعلامیه: نتیجه گیری ادبیات بر مکانیسم کلاژن نوع II متمرکز است و اثربخشی محصول بر اساس داده های اندازه گیری واقعی مشتریان Hunan Jiayi است. اثرات فردی ممکن است متفاوت باشد. لطفاً طبق دستورالعمل پزشک استفاده کنید.

 

منابع Gudmann NS ، MA Karsdal. بیوشیمیایی کلاژن (2016) ، الزوایر.

[1] Gelse K ، Poschl E ، Aigner T. Collagens - ساختار ، عملکرد و بیوسنتز. مشورت

دارو Deliv Rev 2003 ؛ 55: 1531-46.

[2] Mienaltowski MJ ، Birk DE. ساختار ، فیزیولوژی و بیوشیمی کلاژن. مشورت

Exp Med Biol 2014 ؛ 802: 5-29.

[3] Prockop DJ ، Sieron AL ، Li SW. Procollagen N-Proteinase و Procollagen C

پروتئیناز دو متالوپروتئیناز غیرمعمول که برای پروکلاژن ضروری هستند

پردازش احتمالاً نقش مهمی در توسعه و سیگنالینگ سلولی دارد. ماتریس

بیول 1998 ؛ 16: 399-408.

[4] Ricard-Blum S ، Ruggiero F. خانواده فوق العاده کلاژن: از ماتریس خارج سلولی تا

غشای سلولی. پاتول بیول (پاریس) 2005 ؛ 53: 430-42.

[5] Nelson F ، Dahlberg L ، Laverty S ، Reiner A ، Pidoux I ، Ionescu M ، et al. مدارکی برای

سنتز تغییر یافته کلاژن نوع II در بیماران مبتلا به آرتروز. J Clin Invest 1998 ؛

102: 2115‒25.

[6] Sandell LJ ، Morris N ، Robbins JR ، Goldring MB. از طرف دیگر تقسیم شده نوع II

mRNA های پرولاژن جمعیت متمایز سلول ها را در طول مهره ها تعریف می کنند

توسعه: نمایش دیفرانسیل از آمینه-پروپپتید. J Cell Biol 1991 ؛ 114:

1307‒19.

[7] Aigner T ، Zhu Y ، Chansky HH ، Matsen III FA ، Maloney WJ ، Sandell LJ. بیان مجدد

از نوع IIA Procollagen توسط کندروسیت های مفصلی بزرگسالان در غضروف استئوآرتریت.

آرتریت روم 1999 ؛ 42: 1443-50.

[8] Hayashi S ، Wang Z ، Bryan J ، Kobayashi C ، Faccio R ، Sandell LJ. کلاژن نوع II

N-propeptide ، piibnp ، بقای سلول و جذب استخوان استئوکلاست ها را از طریق

سیگنالینگ با واسطه اینتگرین. Bone 2011 ؛ 49: 644-52.

[9] Wang Z ، Bryan J ، Franz C ، Havlioglu N ، Sandell LJ. نوع IIB Procollagen NH (2)-

پروپپتید باعث مرگ سلولهای تومور از طریق تعامل با اینتگرین های آلفا (V) بتا می شود (3)

و آلفا (v) بتا (5). J Biol Chem 2010 ؛ 285: 20806‒17.

[10] Kannu P ، Bateman J ، Savarirayan R. فنوتیپ های بالینی مرتبط با نوع II

جهش کلاژن. J Paediatr Health Health 2012 ؛ 48: E38-43.

[11] Wu JJ ، Eyre DR ، Slayter HS. کلاژن نوع VI دیسک بین مهره ای. بیوشوشیمیایی

و خصوصیات الکترون و میکروسکوپی پروتئین بومی. Biochem J 1987 ؛ 248:

373‒81.

[12] Li SW ، Prockop DJ ، Helminen H ، Fassler R ، Lapvetelainen T ، Kiraly K ، et al. ترانس

موشهای ژنیک با غیرفعال کردن هدفمند ژن Col2 alpha 1 برای کلاژن II توسعه

یک اسکلت با استخوان غشایی و پریوستال اما استخوان اندوکندری ندارد. ژن ها

Dev 1995 ؛ 9: 2821‒30.

[13] Cremer MA ، Rosloniec EF ، Kang AH. Collagens غضروف: بررسی آنها

ساختار ، سازماندهی و نقش در پاتوژنز آرتریت تجربی در حیوانات

و در بیماری روماتیسمی انسان. J Mol Med (برل) 1998 ؛ 76: 275-88.

[14] برند DD ، Kang AH ، Rosloniec EF. ایمونوپاتوژنز آرتریت کلاژن.

Springer Semin Immunopathol 2003 ؛ 25: 3‒18.

[15] Trentham DE ، Townes AS ، Kang Ah. خود ایمنی به کلاژن نوع II

مدل تجربی آرتروز. J Exp Med 1977 ؛ 146: 857-68.

[16] Horton WA. پیشرفت در chondrodysplasias انسان: ژنتیک مولکولی. آن نیویورک آکاد

SCI 1996 ؛ 785: 150-9.

[17] Dahlberg L ، Billinghurst RC ، May P ، Nelson F ، Webb G ، Ionescu M ، et al. انتخابی

تقویت شکاف کلاژناز واسطه کلاژن ساکن نوع II در کشت

غضروف پوکی استخوان و دستگیری با یک مهار کننده مصنوعی که کلاژناز 1 را جمع می کند

(ماتریس فلز-لپروتئیناز 1). آرتریت روم 2000 ؛ 43: 673-82.

[18] Hollander AP ، Heathfield TF ، Webber C ، Iwata Y ، Bourne R ، Rorabeck C ، et al.

افزایش آسیب به کلاژن نوع II در غضروف مفصلی پوکی استخوان شناسایی شده توسط

New Immunoassay. J Clin Invest 1994 ؛ 93: 1722-32.

[19] Yasuda T ، Poole AR. یک قطعه فیبرونکتین باعث تخریب کلاژن نوع II توسط توسط

کولاژ-نیز از طریق یک مسیر واسطه اینترلوکین 1. آرتریت روم 2002 ؛ 46: 138 -

48.

[20] Van Den Steen PE ، Proost P ، Grillet B ، Brand DD ، Kang AH ، Van DJ ، et al. شکاف

کلاژن طبیعی دناتوره شده نوع II توسط ژلاتیناز نوتروفیل B آنزیم را نشان می دهد

ویژگی ، اصلاحات پس از ترجمه در بستر ، و شکل گیری

اپی توپ باقیمانده در آرتریت رومایی. Faseb J 2002 ؛ 16: 379-89.

[21] یاسودا T. پپتید کلاژن نوع II AKT را که منجر به فاکتور هسته ای-kappab می شود تحریک می کند

فعال سازی: مهار آن توسط هیالورونان. Biomed Res 2014 ؛ 35: 193-9.

[22] Yasuda T ، Tchetina E ، Ohsawa K ، Roughley PJ ، Wu W ، Mousa A ، et al. پپتیدها

کلاژن نوع II می تواند شکاف کلاژن نوع II و Aggrecan را در مفصلی القا کند

غضروف ماتریس بیول 2006 ؛ 25: 419-29.

[23] Elsaid KA ، شرکت Chichester بررسی: نشانگرهای کلاژن در بیماری های اولیه آرتریت. کلین

Chim Acta 2006 ؛ 365: 68-77.

[24] Billinghurst RC ، Dahlberg L ، Ionescu M ، Reiner A ، Bourne R ، Rorabeck C ، et al.

شکاف پیشرفته کلاژن نوع II توسط کلاژنازها در مفصلی پوکی استخوان

غضروف J Clin Invest 1997 ؛ 99: 1534-45.

[25] Poole AR ، Ionescu M ، Fitzcharles MA ، Billinghurst RC. ارزیابی غضروف

degrada-in vivo: توسعه سیستم ایمنی برای اندازه گیری در بدن

مایعات کلاژن نوع II توسط کلاژنازها شکسته می شوند. J Immunol Methods 2004 ؛ 294: 145 -

53.

[26] Nemirovskiy OV ، DREFIELD DR ، SUNYER T ، AGGARWAL P ، WELSCH DJ ، MATHEWS WR.

کشف و توسعه یک Neoepitope کلاژن نوع II (Tiine) نشانگر برای

فعالیت متالوپرو-تویناز ماتریس: از آزمایشگاهی تا داخل بدن. Anal Biochem 2007 ؛ 361: 93 -

101.

[27] Otterness IG ، Downs JT ، Lane C ، Bliven ML ، Stukenbrok H ، Scampoli DN ، et al.

تشخیص آسیب ناشی از کلاژناز کلاژن توسط 9A4 ، یک مونوکلونال C

ترمینال نئوپیتوپ آنتی بدن. ماتریس بیول 1999 ؛ 18: 331-41.

[28] Downs JT ، Lane CL ، Nestor NB ، McLellan TJ ، Kelly MA ، Karam GA ، et al. تحلیل

شکاف کلاژناز از کلاژن نوع II با استفاده از Neoepitope ELISA. j Immunol

روش های 2001 ؛ 247: 25-34.

[29] Lippiello L ، Hall D ، Mankin HJ. سنتز کلاژن در انسان طبیعی و پوکی استخوان

Carti-Lage. J Clin Invest 1977 ؛ 59: 593-600.

[30] Takahashi T ، Naito S ، Onoda J ، Yamauchi A ، Nakamura E ، Kishino J ، et al.

توسعه یک ایمونواسی جدید برای اندازه گیری کلاژن نوع II

neoepitope تولید شده توسط شکاف Col-Lagenase. Clin Chim Acta 2012 ؛ 413: 1591-9.

[31] Christgau S ، Garnero P ، Fledelius C ، Moniz C ، Ensig M ، Gineyts E ، et al. نوع کلاژن

قطعات C-telopeptide II به عنوان شاخص تخریب غضروف. Bone 2001 ؛ 29: 209-15.

[32] Bay-Jensen AC ، Liu Q ، Byrjalsen I ، Li Y ، Wang J ، Pedersen C ، et al. وابسته به آنزیمی

سنجش ایمو-نوسبنت (ELISA) برای کلاژن نوع II متالوپروتئیناز

Neoepitope ، CIIM - افزایش CIIM سرم در افراد مبتلا به رادیوگرافی شدید

استئوآرتریت. Clin Biochem 2011 ؛ 44: 423-9.

[33] Bay-Jensen AC ، Wichuk S ، Byrjalsen I ، Leeming DJ ، Morency N ، Christianen C ، et al.

قطعات پروتئینی برای لانه زدن سیرک از غضروف و تخریب بافت همبند هستند

نشانگرهای تشخیصی و پروگ-نوستیک آرتریت روماتوئید و اسپوندیلیت آنکیلوز.

PLOS ONE 2013 ؛ 8: E54504.

[34] Bay-Jensen A ، Leeming D ، Kleyer A ، Veidal S ، Schett G ، Karsdal M. Ankylosing

اسپوندیلیت با افزایش گردش مالی چندین مختلف مشخص می شود

گونه های کلاژن مشتق از متالوپروتئیناز: یک مطالعه مقطعی. روماتول int 2012 ؛

32:3565‒72.

[35] Rousseau JC ، Sandell LJ ، Delmas PD ، Garnero P. توسعه و کاربردهای بالینی

در آرتریت یک ایمونواسی جدید برای پروپپتید نوع سرم IIA Procollagen NH2.

Methods Mol Med 2004 ؛ 101: 25-37.

[36] Fukui N ، McAlinden A ، Zhu Y ، Crouch E ، Broekelmann TJ ، Mecham RP ، et al. فرآیند

ورود به پروپپتید آمینو از نوع II توسط متالوپروتئینازهای ماتریس. J Biol Chem

2002;277:2193‒201.

[37] Gudmann NS ، Wang J ، Hoielt S ، Chen P ، Siebuhr AS ، He Y ، et al. گردش مالی غضروف

منعکس شده توسط پردازش متابولیک کلاژن نوع II: یک نشانگر جدید آنابولیک

عملکرد در chondro-cytes. Int J Mol Sci 2014 ؛ 15: 18789-803.

[38] Madsen SH ، Sondergaard BC ، Bay-Jensen AC ، MA Karsdal. تشکیل غضروف

اندازه گیری شده توسط یک روش جدید PIINP نشان می دهد که IGF-I تحریک نمی کند اما حفظ می کند

شکل گیری غضروف سابق. Scand J Rheumatol 2009 ؛ 38: 222‒6.

[39] Myllyharju J ، Kivirikko Ki. کلاژن ها و بیماری های مرتبط با کلاژن. Ann Med 2001 ؛ 33: 7 -

21.

[40] Van Der Rest M ، Garrone R. Collagen Family of Proteins. Faseb J 1991 ؛ 5: 2814‒23.

[41] Kirsch T ، Pfaffle M. اتصال انتخابی لنگرگاه CII (ضمیمه V) به نوع II و X

کلاژن و به کندروالسین (C-propeptide از کلاژن نوع II). پیامدهای

عملکرد لنگرگاه بین وزیکول های ماتریس و پروتئین های ماتریس. FEBS LETT 1992 ؛ 310:

143‒7.

[42] An B ، Abbonante V ، Yigit S ، Balduini A ، Kaplan DL ، Brodsky B. تعریف

سایت اتصال کلاژن نوع II بومی و دناتوره شده برای فیبرونکتین با استفاده از یک نوترکیب

سیستم کلاژن. J Biol Chem 2014 ؛ 289: 4941-51.

[43] Eyre DR. کلاژهای غضروف مفصلی. Semin Arthritis Rheum 1991 ؛ 21: 2‒11.

[44] Eyre Dr ، Weis MA ، Wu JJ. کلاژن غضروف مفصلی: یک چارچوب غیر قابل تعویض؟

Eur Cell Mater 2006 ؛ 12: 57-63.

[45] Trentham DE ، Townes AS ، Kang AH ، David Jr. حساسیت هومورال و سلولی به

کلاژن در آرتریت ناشی از کلاژن نوع II در موش صحرایی. J Clin Invest 1978 ؛ 61: 89-96.

[46] Sondergaard BC ، Olsen AK ، Sumer EU ، Qvist P ، Bagger YZ ، Tanko LB ، et al. کلسیمونین

تحریک پروتئوگلیکان و بیوسنتز کلاژن نوع II در غضروف مفصلی در داخل بدن.

غضروف Odearthri-Tis 2005 ؛ 13: 142.